在高效液相色譜中，溶劑是指用于制備流動(dòng)相、溶解和輸送樣品的溶液。流動(dòng)相是影響HPLC的性能的主要因素，它的性質(zhì)必須滿足HPLC測(cè)試的嚴(yán)格要求。在選擇溶解樣品的溶劑和其他與制備樣品有關(guān)的溶劑時(shí)，同樣也需考慮這些溶劑的性質(zhì)與檢測(cè)器的兼容性。

在樣品的檢測(cè)波長(zhǎng)下，所選流動(dòng)相的吸光度最好是A<0.2AU，特別是在梯度洗脫中，較低的吸光度意味著能獲得更好的檢測(cè)精度和更好的結(jié)果。但是，在等度洗脫中吸光度稍高的溶劑也是可以接受的。選用紫外檢測(cè)波長(zhǎng)低于200nm的溶劑是很罕見的，除非是用于檢測(cè)那些在高于200nm波長(zhǎng)處吸光度低的物質(zhì)。

因?yàn)樗诖笥诘扔?00nm波長(zhǎng)都無紫外吸收，所以含水流動(dòng)相的吸光度，等于純?nèi)軇┑奈舛瘸艘粤鲃?dòng)相B溶劑的體積分?jǐn)?shù)φ。例如，在215nm波長(zhǎng)，當(dāng)B為以下各種不同溶劑時(shí)，含有25％B溶劑的流動(dòng)相的吸收值A(chǔ)分別對(duì)應(yīng)：乙腈，0.00AU；甲醇，0.09AU；脫氣甲醇，0.05AU；四氫呋喃，0.22AU；異丙醇，0.07AU。注意，脫氣甲醇降低了氧氣在純?nèi)軇┲械臐舛?，?dǎo)致在200～240nm波長(zhǎng)下，吸光度降低了接近1/3。當(dāng)用充氦氣的方法進(jìn)行流動(dòng)相脫氣后，由于溶劑中氧氣含量的比例下降，流動(dòng)相中的B溶劑吸光值也會(huì)降低。氧氣在低極性溶劑（如四氫呋喃和異丙醇）中溶解度更高，因此，在實(shí)踐當(dāng)中，低極性溶劑的吸光值可能會(huì)比理論值更高。（理論值見<液相色譜方法開發(fā)中紫外吸收波長(zhǎng)的選擇>）

水在波長(zhǎng)≥200nm時(shí)無吸收，這是假定水是經(jīng)過嚴(yán)格純化的。HPLC級(jí)水在ASTM D1193中有詳細(xì)說明。在低波長(zhǎng)中檢測(cè)，有時(shí)不但會(huì)要求水中的總有機(jī)碳（TOC）低于50ppb，而且要有足夠高的電阻率。

在等度洗脫中，流動(dòng)相的選擇通常不受RI檢測(cè)器的限制。可通過選擇折光率跟樣品成分折光率有較大差異的流動(dòng)相，從而提高檢測(cè)靈敏度。基于差分測(cè)量的檢測(cè)器（如：RI）不能用于梯度洗脫。因?yàn)橥ǔＧ闆r下A、B溶劑之間的響應(yīng)值相差很大。

流動(dòng)相在MS接口蒸發(fā)，流動(dòng)相一般由水、有機(jī)溶劑組成，揮發(fā)性添加劑的使用也很常見（添加劑不能是非揮發(fā)性緩沖劑或鹽）。因?yàn)橐呀?jīng)去除流動(dòng)相，所以在LC-MS中并不存在流動(dòng)相的紫外吸收，但是溶劑中不能有顆粒存在。